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镜像绮点(上海)细胞技术有限公司
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细胞完全培养基配置使用方法
12430 人阅读发布时间:2020-09-25 10:42
细胞培养体系一般由以下四种(三种)组成:
名称 | 体积 | 保存条件 |
基础培养基 | 500ml | 4℃、避光 |
添加剂 | 5ml | -20℃、避光 |
胎牛血清(FBS) | 0-50ml | -20℃、避光 |
双抗(青霉素/链霉素,P/S) | 5ml | -20℃、避光 |
添加剂和双抗通常浓度为 100X(100 倍工作浓度)。血清的添加比例有 0%(不添加),1%(5ml), 2%(10ml),5%(25ml),10%(50ml)几种。
第一次使用时先将-20℃保存的添加剂、双抗、FBS 转移到 4℃溶解后,在灭菌后的百级洁净等级环境中操作,所使用的容器和移液耗材均需要进行过无菌处理。
首先将解冻的 FBS、添加剂和双抗进行分装,平均分装成 5-10 份,留下本次配制所需要的量, 剩余的继续放回-20℃保存,之后按需取用融化后配制完全培养基,避免反复冻融。
建议用无菌的 50ml 离心管盛装配置好的完全培养基。
配制方法:在每个 50ml 离心管中加入①500ul 添加剂、②500ul 双抗、③50×血清百分比ml 的胎牛血清、④(50×(1-血清百分比)-1)ml 的基础培养基。配制完成后盖上盖子, 颠倒混匀备用。
例如:在血清比例为 5%的条件下,50ml 离心管中各组分的体积分别为:
基础培养基:(50×(1-5%)-1)=46.5ml+添加剂:500ul +双抗:500ul+血清:50×5%=2.5ml
配置好的培养基置于 4℃避光保存。由于添加剂中有很多重组蛋白,易发生降解,故配置好的完全培养基有效期仅为 3-4 周,请尽快使用。因此建议每次配制 1-2 管(50-100ml),当然使用量大的情况下也可以适量增加配置量。
P. S.:不建议客户将全部的血清、双抗、添加剂直接加入基础培养中混匀使用,原因如下: 1.500ml 的基础培养基的体积较大,灌装时体积波动很大,直接加入,无法准确地控制因子和血清的工作浓度。
- 配制好的培养基仅能在 4℃保存 3-4 周,如果期间没用完,继续使用会影响培养效果。如果是-20℃保存,可以延长保存时间,但是反复冻融也会影响完全培养基的效果。
- 如果使用培养基时由于操作失误导致污染,分装能减少培养基的损失量。