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如何学会分离培养人的真皮成纤维细胞？
人阅读 发布时间：2022-08-10 19:32
真皮成纤维细胞（又称皮肤成纤维细胞）属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于人正常的皮肤组织，真皮成纤维细胞是一种贴壁培养方式的细胞，由于这些细胞非常容易培养，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。
一般而言，成纤维细胞能够分泌I型和 III 型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。
伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。
以下是赛百慷提供的一种人真皮成纤维细胞的制备方式（仅供参考）：
一般而言，成纤维细胞能够分泌I型和 III 型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。
伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。
- 首先在分离真皮成纤维细胞时要做到在无菌条件下进行，打开生物安全柜紫外灯 30min 作无菌处理。
- 将手术废弃的皮肤组织浸泡 75% 酒精，消毒 2min，
- 将皮肤组织置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍，
- 然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等，
- 将皮肤剪成 0.5*0.5 cm 小块，放入 dish 中，加 0.1% 的 dispase 溶液，封口膜封口，4℃ 冰箱过夜消化，
- 第二天，用镊子将表皮与真皮分开（薄的那层是表皮，厚的那层是真皮），
- 将真皮剪碎，移至离心管，用 0.1% 胶原 Ⅰ 型酶+0.1% 胶原Ⅱ型酶+0.1% 胶原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴锅中消化至少 2 h（视消化程度而定），
- 用 100 μm 网筛过滤，
- 取滤液，300 g，离心5 min，
- 用完全培养基重悬沉淀，
- 铺瓶，
- 隔天换液。
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