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赛百慷(上海)生物技术股份有限公司(iCellBioscience,Inc.)是一家专注于高品质原代细胞、细胞株/系、iPS细胞产品的研发和生产,并提供专业的技术外包服务的高新生物技术企业,总部位于上海。赛百慷( ... [详细介绍]

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原代细胞免疫荧光鉴定步骤【赛百慷】

发布时间:2017-08-28 16:06 点击次数:

         为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞,使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型,免疫荧光技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。 一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤,仅做参考:

      1.细胞爬片
      取4片玻璃片于24孔板中,每孔加入培养基1mL,加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。
      2.固定
      细胞爬片后,吸出培养基,用PBS洗一遍,加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS,放4℃过夜。
      3.破膜封闭
      将玻片除去水分,置于培养皿支撑物上,
      玻璃片封闭液配置:0.5% Trition X-100与PBS 1:1混合,再加10% 血清,
      取50uL破膜封闭液滴于防水膜上,将玻片上有细胞的一面盖上2h。
      4.一抗孵育
       一抗配置:抗体与PBS 1:100(200)稀释
      破膜后,取50uL一抗于防水膜上(湿盒中),将玻片有细胞的一面盖上置于4℃(最多可放置一周)
      阴性对照组可用PBS代替一抗。
      5.二抗孵育
      PBS洗3×5min/次,
      二抗混合液配置:二抗:PBS=1:500
                                    DAPI:PBS=1:1000
      防水膜上滴50uL二抗混合液,盖上玻片,避光,室温放置2h。
      6.包埋

      PBS洗3×5min/次,玻片上各滴1滴Fluoromount-G,将有细胞的一面盖上。