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赛百慷(上海)生物技术股份有限公司(iCellBioscience,Inc.)是一家专注于高品质原代细胞、细胞株/系、iPS细胞产品的研发和生产,并提供专业的技术外包服务的高新生物技术企业,总部位于上海。赛百慷( ... [详细介绍]

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细胞筛选方法和步骤【赛百慷】

发布时间:2017-08-28 16:08 点击次数:

        筛选步骤:
       a.杀灭曲线的确定
       1.将未转染的细胞按每孔0.05million铺入24孔板,孵育过夜,
       2.第二天,除去24孔板中旧的培养基,
       3.将含不同浓度嘌呤霉素(1ug/mL,2ug/mL,3ug/mL,4ug/mL,5 ug/mL,6ug/mL,7ug/mL)的新鲜培养基加入已铺有细胞的24孔板,
       4.每2天更换新鲜的筛选培养基,
       5.每天观察细胞的存活比例,

       6.最小的嘌呤霉素使用浓度就是从嘌呤霉素筛选开始1-4d内杀死所有细胞的最低筛选浓度。

 

 

 
      b.嘌呤霉素筛选转染细胞
      1.第一天,将转染的细胞按每孔0.05million铺入24孔板,孵育过夜
      2.第二天,除去24孔板中旧的培养基,
      3.加入含嘌呤霉素(2ug/mL)的筛选培养基,孵育,
      4.每2天更换新鲜的筛选培养基,
      5.每天观察细胞的存活比例,
      6.在同一时间点(2d)存活的细胞,即为转染成功细胞,
      7.对筛选后的细胞进行扩增。