细胞筛选方法和步骤【赛百慷】

        筛选步骤：
       a.杀灭曲线的确定
       1.将未转染的细胞按每孔0.05million铺入24孔板，孵育过夜，
       2.第二天，除去24孔板中旧的培养基，
       3.将含不同浓度嘌呤霉素（1ug/mL，2ug/mL，3ug/mL，4ug/mL，5 ug/mL，6ug/mL，7ug/mL）的新鲜培养基加入已铺有细胞的24孔板，
       4.每2天更换新鲜的筛选培养基，
       5.每天观察细胞的存活比例，

       6.最小的嘌呤霉素使用浓度就是从嘌呤霉素筛选开始1-4d内杀死所有细胞的最低筛选浓度。

        b.嘌呤霉素筛选转染细胞
      1.第一天，将转染的细胞按每孔0.05million铺入24孔板，孵育过夜
      2.第二天，除去24孔板中旧的培养基，
      3.加入含嘌呤霉素（2ug/mL）的筛选培养基，孵育，
      4.每2天更换新鲜的筛选培养基，
      5.每天观察细胞的存活比例，
      6.在同一时间点（2d）存活的细胞，即为转染成功细胞，
      7.对筛选后的细胞进行扩增。